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<p><span style="text-wrap: nowrap;"><img src="http://proec57c364.pic8.websiteonline.cn/upload/222.jpeg" width="2560" height="1920"/>一、区域划分</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">按功能可分为:实验区、准备区和办公区。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">01</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">实验区</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">样本接收区:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">接收临床送检的体液及石蜡样本,核对患者信息,对所接收的样本进行登记编号,体液样本置于4℃保存,及时处理。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">样本前处理区:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">用于组织切片、脱蜡、染色及血液、尿液、胸腹水等标本的离心、涂片、染色等。体系突变检测时,需对组织学或细胞学样本进行病理质控,目的是进一步明确病变组织或细胞与病理诊断是否一致;评估肿瘤细胞的比例是否达到检测要求;确定肿瘤细胞位置,富集肿瘤细胞,避免出血、坏死、间质细胞影响DNA质量。因该区域使用二甲苯等有毒有害物质,需设置通风橱,做好化学安全防护,且配有废液桶,废弃的二甲苯等化学污染物统一回收处理。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">试剂暂存及准备区:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">试剂暂存区需配备4℃和-20℃以下冰箱,按照试剂储存条件分别储存,并记录使用情况。准备区根据反应体系,配制各反应试剂。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">样本制备区:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">石蜡样本癌组织的富集、样本的消化、DNA和RNA的提取及OD值的测定。该区域安置外排式二级生物安全柜,降低实验过程中产生的有害气溶胶对实验人员和环境的危害。特别是用于检测胚系突变的血液样本和携带各种病毒的样本,均需在生物安全柜内完成操作,做好生物安全防护。如有计划开展通过超敏感的方法对血液中微量的循环DNA进行检测的项目,本区域需独立划分用于提取微量循环DNA区域,防止其他样本高浓度的DNA对微量循环DNA的污染。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">核酸片段化区:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">样本核酸的打断。该区域可能产生核酸气溶胶,属于核酸污染区,需要做好相应防护的清洁处理。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">PCR扩增一区:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">第1次PCR扩增。在PCR过程中可产生大量短片段的核酸,是核酸气溶胶的重要来源。该区域属于核酸污染区,需要尽量避免PCR反应时的爆管和PCR反应后开盖,一旦发生要做好记录并及时做好核酸污染的清洁处理,并监测空气中是否已经存在气溶胶。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">产物分析区:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">对PCR产物或打断后的核酸进行电泳检测。核酸片段化分为机械打断和酶消化打断,机械打断后需要对产物进行电泳检测,评估核酸片段化状态。该区域存在核酸片段化后或PCR扩增后产物开盖的操作,也是核酸气溶胶重要来源的区域,属于核酸污染区。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">纯化一区:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">第1次PCR产物纯化、第1次杂交、第1次捕获、第2次杂交、第2次捕获及捕获样本纯化。该区域存在PCR扩增后产物开盖的操作,是核酸气溶胶重要来源的区域,属于核酸污染区。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">PCR扩增二区:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">第2次PCR扩增。注意事项同PCR扩增一区。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">纯化二区:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">第2次PCR产物纯化及文库检测。注意事项同纯化一区。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">测序区:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">放置测序仪,进行上机测序。该区域自身不产生核酸气溶胶,但需要采取防止被气溶胶污染的措施,属于核酸半污染区。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">数据分析区:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">数据处理分析,结果解读及报告打印。该区域自身不产生核酸气溶胶,属于核酸半污染区。此外,若建立荧光原位杂交技术检测平台,需独立设置以下两个区域:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">荧光原位杂交区:此区域主要进行低渗、预固定、固定、滴片、老化、消化、洗片、变性、杂交、再洗片等工作,该区域处理可能携带生物危害物的血液、骨髓、尿液或其他体液,需配备生物安全柜或通风橱,预防生物污染物对工作人员的伤害。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">荧光原位杂交观察区:避光、安置荧光显微镜,观察结果。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">2</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">实验准备区</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">高温灭菌室:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">配备高压蒸汽灭菌器和高温烘箱,设备功率较高,需单独线路配电。因高压蒸汽设备,该区域空气交换12次/h。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">危险品仓库:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">该区域应远离实验室和办公区,安全出口通畅。所有危险化学品必须存放到铁柜中,对于有腐蚀性、易燃易爆性的试剂,采取防腐防爆和通风措施,且铁柜上加装挂锁,钥匙专人保管。危险品仓库应配有灭火器和灭火沙桶,做好防火工作。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">一般仓库:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">存放移液器吸头、离心管等,紧贴墙壁安装货架,将各类耗材按序排放,便于取用。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">试剂储存间:</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">试剂储存分为室温储存(18℃-26℃)、冷藏储存(2℃-8℃)和冷冻储存(-20℃以下),试剂储存间的冰箱和冷冻柜产生大量的热,需安装通风系统,注意环境温度的控制。冰箱和冷冻柜应装配带警示的温度监测系统,当温度异常时发出警报,工作人员可及时处理,避免试剂失效。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">3</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">办公区该区</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">主要用于实验人员工作、学习、休息场所,为洁净区,需要远离生物污染区和危险品仓库。对于步骤多、流程长的检测平台,为防止污染,实验室功能区设计尽量细分。如果实验室有多个检测技术平台,根据使用仪器的功能,可适当合并功能区。笔者认为,实验室的污染分为生物污染和核酸污染,生物污染主要是在处理体液样本的区域,而核酸污染主要在核酸提取、扩增和分析的区域。据此,应将实验室划分为以生物污染对象的生物污染区、生物半污染区和生物洁净区,也可以将实验室划分为以核酸污染对象的核酸污染区、核酸半污染区和核酸洁净区。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">二、气流流向</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">PCR实验室中容易产生核酸短片段形成的气溶胶污染,气溶胶是悬浮于气体介质中的由粒径为0.001μm~100μm的固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系。一旦发生核酸气溶胶污染,会直接导致核酸检测结果出现错误,并且比较难以去除这种污染。为防止核酸气溶胶污染,各功能区需安装独立的通风系统,密封,不得交叉通风,避免交叉污染。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">对于实验室通风,气流宜采用上送下排方式,送风口和排风口布置应有利于室内可能被污染空气的排出,在生物安全柜操作面或其他有气溶胶产生的地点上方附近不应设置送风口。各区域空气交换12次/h~16次/h。实验室亦可采取窗户进行自然通风,但需设防虫纱窗和防节肢动物设施。有条件的实验室可安装负压装置,功能区内气压(负压)与室外大气压的压差值应>30Pa,与相邻区域的压差(负压)应>10Pa。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">三、缓冲区间</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">实验功能区均需设置缓冲区间,控制空气的流向,缓冲区间门具有互锁功能,不能同时处于开启状态。缓冲区间内设置非手动开关的洗手装置、衣架或衣柜,方便实验人员进出换实验服。不同功能区缓冲区间应使用不同颜色的工作服,工作人员离开各缓冲区间不得将工作服带出。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">四、应急设置</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">应在样本前处理区和样本制备区内安置紧急冲淋洗眼器及紧急淋浴装置,便于紧急事故的处理。实验室内应设置火灾自动报警装置和应急照明装置,安全通道有消防疏散指示标志,并配备适用的应急器材,如消防器材、意外事故处理器材、急救器材等。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">五、温湿度控制</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">测序区、PCR扩增一区和二区等放置大型精密仪器的区域应恒温恒湿,相对湿度宜控制在30%~70%范围内。温度宜控制在18℃~26℃范围内,2h内温度波动应<2℃,避免环境因素影响实验结果。</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">六、二级生物安全实验室</span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;"><br/></span></p><p><span style="text-wrap: nowrap;">二级生物安全实验室的用电负荷不宜低于二级,大型重要精密设备需单独线路配电,并配备不间断电源(UPS),保证电源电压的稳定。另外,各功能区需安装可定时的紫外灯,紫外灯发出波长为254nm的紫外线,可使长片段的核酸断裂,即防止生物污染,又防止核酸污染。安装在抛光天花板上的固定紫外灯距地面距离<2.1m,紫外灯的数量由各区域空间决定,确保照射剂量>9000uW·s/cm。</span></p><p><br/></p>
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